Kako bi se spriječila unakrsna kontaminacija tijekom rada, glavni zahtjevi za njegovo projektiranje, izgradnju i upravljanje pogonom su:
1. Projektiranje i konstrukcija laboratorija, siguran radni sustav ili sigurnosni standardni operativni postupci udovoljavaju zahtjevima trenutnog&"Opći zahtjevi za laboratorijsku biološku sigurnost GG"; GB19489.
2. PCR je podijeljen u četiri funkcionalna područja prema radnim koracima, a to su područje skladištenja i pripreme reagensa, područje pripreme uzorka, područje amplifikacije i područje analize proizvoda za pojačavanje. Ako je opremljen fluorescentnim fluorescentnim instrumentom u stvarnom vremenu, područja za pojačavanje i analizu proizvoda mogu se kombinirati. Svako funkcionalno područje mora biti jasno označeno, a oprema i predmeti na različitim funkcionalnim područjima ne smiju se miješati.
Smjer strujanja zraka laboratorija PCR može se provesti u skladu s područjem skladištenja i pripreme reagensa → područja pripreme uzorka → područja amplifikacije → područja pojačanog ispitivanja proizvoda kako bi se spriječilo da pojačani proizvodi uđu u prethodno pojačano područje zajedno s protokom zraka. Može se izvesti na način smanjenja tlaka zraka iz prostora za skladištenje i pripremu reagensa → područje pripreme uzorka → područje pojačanja → područje analize proizvoda za pojačavanje. To se može postići ugradnjom ispušnih ventilatora, ispušnih uređaja s negativnim tlakom ili drugim izvedivim metodama.
3. Ulazak u svako radno područje treba strogo slijediti jedan smjer, odnosno područje skladištenja i pripreme reagensa → područje pripreme uzorka → područje amplifikacije → područje analize proizvoda za pojačavanje. Treba koristiti različita radna područja (poput različitih boja). Radnici ne smiju iznijeti radnu odjeću kad napuste svako radno područje.
4. Čišćenje laboratorija treba obaviti u smjeru skladišta i pripreme reagensa → područje pripreme uzorka → područje amplifikacije → područje pojačanog ispitivanja proizvoda. Različita eksperimentalna područja trebaju imati vlastite uređaje za čišćenje kako bi se spriječila unakrsna kontaminacija.
5. Nakon završetka radova, radno područje se mora odmah očistiti. Površina laboratorijske klupe u radnom području trebala bi biti u stanju izdržati dezinfekciju i učinke čišćenja kemikalija kao što je natrijev hipoklorit. Ultraljubičasto zračenje na površini laboratorijske klupe trebalo bi biti prikladno i učinkovito. Budući da su udaljenost i energija ultraljubičastog zračenja vrlo kritična za dekontaminacijski učinak, može se koristiti pomična ultraljubičasta svjetiljka (valna duljina 254nm), a nakon završetka radova može se prilagoditi ozračivanju unutar 60-90cm na eksperimentalnom stolu , Budući da je pojačani proizvod samo nekoliko stotina ili desetina baznih parova (bp), on nije osjetljiv na UV oštećenja, pa UV-zračeni pojačani fragment mora biti zračen dulje vrijeme, poželjno preko noći.
Funkcije područja skladištenja i pripreme reagensa su: priprema skladišnih reagensa, raspršivanje reagensa i priprema reakcijske smjese za pojačavanje, kao i skladištenje i priprema potrošnog materijala kao što su epruvete i vrhovi centrifuge. Materijali poput skladišnih reagensa i potrošnog materijala koji se koriste za pripremu uzorka trebaju se izravno transportirati u područje skladištenja i pripreme reagensa i ne mogu proći kroz područje otkrivanja pojačanja. Materijali za pozitivnu kontrolu i materijali za kontrolu kvalitete u kompletu ne smiju se skladištiti na ovom području, već ih treba skladištiti na ovom području. Područje obrade uzorka.
Funkcija područja pripreme uzorka je: ekstrakcija, skladištenje i dodavanje u epruvetu za pojačavanje nukleinske kiseline (RNA, DNA). Za operacije koje uključuju kliničke uzorke, moraju se ispuniti zahtjevi za zaštitnu opremu, osobnu zaštitu i radne specifikacije za sekundarne laboratorije biološke sigurnosti. Budući da se tijekom miješanja uzoraka i pročišćavanja nukleinskom kiselinom može dogoditi kontaminacija aerosolom, u ovom se području mogu uspostaviti uvjeti pozitivnog tlaka kako bi se izbjegla kontaminacija aerosola iz susjednih područja. Da bi se izbjegla unakrsna kontaminacija između uzoraka, nakon dodavanja nukleinske kiseline koja se ispituje, reakcijska cijev koja sadrži reakcijsku smjesu mora biti pokrivena. Kod potencijalno zaraznih materijala poklopac se mora otvoriti u kabinetu za biološku sigurnost i moraju postojati jasni postupci za postupanje s uzorkom i neaktivacija.
Funkcija zone amplifikacije je: sinteza DNA, amplifikacija i detekcija DNA. Kako bi se izbjeglo onečišćenje uzrokovano aerosolima, šetnja ovim područjem trebala bi biti što manja. Mora se napomenuti da se sve ispitivane reakcijske epruvete ne smiju otvarati na ovom području.
Funkcija pojačanog područja analize proizvoda je: daljnja analiza i određivanje pojačanih fragmenata, poput hibridizacije, elektroforeza digestije enzima, denaturacija analize tekućina visokih performansi, sekvenciranje itd. Proizvodi za amplifikaciju nukleinske kiseline imaju različite metode analize, poput metoda hibridizacije sonde na membranama ili na mikro pločama ili čipovima (označavanje radionuklidom ili neradioaktivno nuklidno označavanje), direktnom ili digestiranom elektroforezom agaroznog gela, elektroforezom poliakrilamidnog gela, južnim prijenosom, postupcima sekvenciranja nukleinskih kiselina, masenom spektrometrijom itd.
Područje analize proizvoda za pojačavanje glavni je izvor onečišćenja proizvoda za amplifikaciju u laboratoriji PCR, tako da treba paziti da proizvod za pojačavanje ne bude izveden kroz predmete i radnu odjeću u ovom području. Kada se koristi PCR-ELISA metoda za otkrivanje pojačanih proizvoda, za pranje ploča mora se koristiti stroj za pranje ploča, a otpadna tekućina mora biti sakupljena u 1 molu / L HCl i ne smije se sipati u laboratorij, već je treba odbaciti iz laboratorija PCR. Pad. Korišteni vrh također se mora namočiti u 1 mol / L HCl i zatim staviti u vreću za smeće za odlaganje prema postupcima, poput spaljivanja. Kako se u ovom području mogu koristiti određene genetske mutacije i toksične tvari kao što su etil-bromid, akrilamid, formaldehid ili radionuklidi itd., Treba obratiti pažnju na zaštitu zaštite eksperimenata.